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石蠟切片法實例(一)
—蘇木精-伊紅對染法
一、目的要求
1、 熟悉石蠟切片的制作過程。
2、 掌握HE染色的基本原理和染色方法。
二、實驗原理
石蠟切片是zui基本的切片技術,冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎上發展起來的。蘇木素與伊紅對比染色法(簡稱H.E.對染法)是組織切片zui常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛,對組織細胞的各種成分都可著色,便于全面觀察組織構造,而且適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色可長期保存。經過HE染色,細胞核被蘇木素染成藍紫色,細胞質被伊紅染色呈粉紅色。
三、實驗用品
(一) 器材
切片機,切片刀,溫臺,恒溫箱,*,鑷子,剪刀,解剖針,單面刀片,小臺木,灑精燈,包埋紙盒,染色缸,燒杯,水盆,熔蠟爐,蠟杯。
(二) 試劑
卡諾(Carnoy)固定液,埃利希蘇木精染液,1%伊紅酒精溶液,1%鹽酸乙醇液,各級酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%),二甲苯,甘油蛋白粘片劑,中性樹膠。
試劑配法:
1、卡諾氏固定液:
100%酒精3份
冰醋酸 1份
或:100%酒精6份
氯仿 3份
冰醋酸 1份
2、埃利希蘇木精染液的配法:
蘇木精 1g
純酒精 50ml
冰醋酸 5 ml
甘油 50 ml
鉀礬(硫酸鋁鉀)約5g(飽和量)
蒸餾水 50 ml
配法:
ⅰ、將蘇木精溶于約15 ml的純酒精中,再加冰醋酸后攪拌。
ⅱ、當蘇木精溶解后即將甘油倒入并搖動容器,同時加入其余的酒精。
ⅲ、將鉀礬在研缽中研碎并加熱,然后將它溶解于水中。
ⅳ、將溫熱的鉀礬溶液一滴一滴地加入上述染液中,并隨時攪動。
ⅴ、此液混合完畢,將瓶口用一層紗布包著小塊棉花塞起來,放在暗處通風的地方,并經常搖動以促進它的成熟。成熟時間約3~4周。若加入0.2g碘酸鈉,可立刻成熟。此液穩定而染色均勻,染核效果良好,不會發生沉淀,長期貯備無妨。此液可分別與伊紅等進行二重染色。
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