一、概述

    PCR又稱聚合酶鏈式反應(Polymerase chain reaction)，是1985年由美國的Kary Mullis*并由美國Cetus公司開發的一項體外擴增DNA的方法。應用該方法可使極微量的特定DNA片段在幾小時內迅速擴增至百萬倍，因而一經問世便在短短的數年內就得到了迅速發晨和實際應用，并在原有基礎上結合各種生化分子生物學技術衍生出了許多改良技術。這些技術顯示出了巨大的潛力，發揮著越來越大的作用，也正因為如此它們被譽為20世紀80年代分子生物學革命和生物技術的飛躍。

（一）PCR原理

     PCR是依據DNA模板的特性，模仿體內的復制過程，在體外合適的條件下以單鏈DNA為模板，以人工設計和合成的寡核苷酸為引物，利用熱穩定的DNA聚合酶延5’-3’方向摻人單核苷酸來特異性的擴增DNA片段的技術。

（二）PCR反應體系

     PCR反應體系主要由引物、dNTP、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、緩沖液、Mg2+和核酸模板組成。

（三）PCR反應參數

     在PCR反應中每輪循環的各步反應時間不應過長，以免降低TaqDNA聚合酶的活性。下面介紹PCR反應中的一些具體參數。

1.變性    

2.退火  

3.延伸  

4.循環次數

（四）常見的PCR種類

1.熱啟動PCR    

2.一步單管PCR    

3.多重PCR

4.依賴PCR的DNA指紋圖譜技術  

5.PCR-單鏈構想多態性分析

6.mRNA差異顯示技術  

7.隨機引物擴增DNA多態性（RAPD）

8.以微衛星DNA介導的PCR技術

9.基因間重復性回文片段（REP）和基因內重復性一致序列（ERIC）的擴增

10.擴增片段長度多態性分析（AFLP）

11.限制性長度多態性分析（RFLP）

12.用于RNA病毒檢測的核酸擴增技術

（五）PCR技術用于檢測的主要步驟

（1）運用化學手段對目標DNA進行提取。

（2）設計并合成引物，引物設計或合成的好壞直接決定PCR擴增的成效。

（3）進行PCR擴增。

（4）克隆并篩選鑒定PCR產物，將擴增產物進行電泳、染色，在紫外光照射下可見擴增特異區段的DNA帶．根據該帶的不同即可鑒定不同的DNA。

（5）DNA序列分析