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各國細胞庫支原體污染的統(tǒng)計表
國家 受支原體污染(%) 報告年度
USA-FDA 15 1993(past 30 years)
USA-ATCC 15-20 1992
Japan-(IFO,RIKEN,JCR 80~30~22 1981 1987-19931998
Germany-DSM 36 1990-1994
Argentina 65 1987
Israel 32 1986-1993
China 95 1990
造成支原體高污染率的原因為:
1.支原體size 0.1~0.8 um,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45 um)
2.支原體污染時,沒有明顯的肉眼或一般光學(xué)顯微鏡可觀察到的特征變化
3.過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式
4.細胞流通間缺乏品管,造成實驗室間的相互污染
5.研究或操作人員忽略污染問題
支原體污染了來源:
1. 已受污染的細胞
2. 操作人員的疏失
3. 已受污染的培養(yǎng)基、血清
4. 操作環(huán)境不良、實驗器具不潔等
由于支原體為人體口腔中之正常菌叢,實驗室之操作人員的污染亦可能為污染源,須十分注意。而萬一細胞已受支原體污染時,*的處理原則為將細胞高壓滅菌后丟棄,以免污染其它潔凈的細胞株。但是若是堅持要作去除支原體污染,有以下幾種方法,只不過結(jié)果會與原始的細胞特性有差異。
去除支原體污染:
1. 抗生素處理:BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasma removal agent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer)
2. Nucleic acid metabolites:5-bromouracil,Hoechst 33258,bromodeoxyuridine
3. Anti-sera
預(yù)防與控制方面可從以下各點加強注意:
設(shè)備方面:
1. 使用已作支原體測試ok之細胞株
2. 于另一隔離之區(qū)域操作未知是否有支原體污染之細胞
3. 使用不添加抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞
檢測方面:定期以標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢測方法檢測細胞、培養(yǎng)基、血清、ddH2O有否被支原體污染。
實驗操作人員之無菌觀念與無菌操作技術(shù)之要求
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