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上海永葉生物科技有限公司

Genome Biology發文介紹RNA印記法

時間:2014-1-10閱讀:625
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生物學家們逐漸意識到,RNA不只是DNA和蛋白之間的過渡產物,它對調節基因的表達有重要作用。深入研究RNA調控,能夠幫助科學家們進一步理解相關疾病。
賓夕法尼亞大學的科學家們開發了分析RNA調控的新方法,這一方法能夠有效獲得RNA與RNA結合蛋白(RBP)互作的所有位點。這一發表在Genome Biology雜志上的文章,不僅鑒定了RBP結合位點中的重要基因突變,還為其他RNA研究者提供了路線圖。
“RNA分子生活史中的每一步都受到RBP的控制,” 文章的資深作者,助理教授Brian D. Gregory 說。“我們希望建立RBP結合位點的數據庫。”這些互作發生的位點,對于理解RNA相關疾病非常重要。“許多研究顯示,RBP或RBP結合位點上的突變影響很大,特別是對大腦而言,”文章的共同*作者Ian M Silverman說。“神經元似乎對RBP缺陷更為敏感。”
研究人員希望開發出類似于DNA印記法(DNA footprinting)的技術。此前也有一些研究團隊進行了RNA印記分析,但他們是使用人工合成的核苷酸來標記蛋白互作的位點,這種方法只能在體外培養的細胞中進行,不能用于組織或整個有機體。賓夕法尼亞大學的研究團隊,在HeLa人類細胞系中對轉錄組進行了分析。他們通過交聯將RNA分子與蛋白連接起來,然后用酶降解RNA分子,并對這些片段進行測序。RNA與蛋白結合的片段會受到保護而免于降解,而在去除了RBP的對照組中RNA不再受到這樣的保護,因此對比兩組的測序結果,就能揭示蛋白的結合位點。研究人員將這一方法稱為PIP-seq。
這項研究驗證了PIP-seq的可重復性,并且向人們展示PIP-seq得到的結果與已知的RBP結合位點相符。研究人員進一步研究RBP的結合位點發現,許多結合位點位于RNA剪切的相關區域。此外,一些反復出現的結合序列,與重要的生物學過程有關,包括發育、免疫和細胞程序性死亡。研究人員通過數據分析指出,許多疾病相關的單核苷酸突變,發生在RBP的結合位點。例如,早發型帕金森癥和遲發性皮膚卟啉病PCT中的突變,都會影響RBP與RNA的相互作用,帕金森突變干擾互作,而PCT突變增強互作。這些發現支持了近年來出現的新觀點,即一些遺傳學疾病(特別是神經學疾病)其實是“RNA病”。

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