細胞培養對替代胎牛血清的適應
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許多細胞zui易于采用連續適用法。將含有FBS的通用培養基和含有替代胎牛血清的培養基按1：1(體積比)混合，用混合后的培養基來培養細胞。每次成功傳代后，按下列比例減少通用培養基的用量：
1：2、1：4、1：16、和99%含替代胎牛血清培養基。
對于每次胎牛血清的成分變化，都要將細胞傳代培養2-3次以進行適應，細胞可能可以適應直接從FBS到替代胎牛血清的轉換。起初要使用和FBS濃度相同的替代胎牛血清。細胞生長可能會發生延遲?？梢詡鞔?-3次，使細胞生長速率恢復到以前的水平。
細胞從單層生長到懸浮培養適應 貼壁細胞對懸浮培養的適應可能需要提高細胞密度或使用無胎牛血清
培養基培養的細胞。本方案說明了使用T-25或T-75培養瓶培養的細胞適應時所需要的步驟。大約需要6-8個T-75培養瓶才可以提供一個轉瓶或搖瓶所需的Hela細胞量(5X107)。
注意：對于不同的細胞系，zui初培養瓶的細胞數量各不相同。為了得到*結果，請遵從下列事項：
使用50-80%匯合的細胞；
使用存活率大于90%的細胞。
1．去除生長培養基。
2．用不含鈣鎂的1XD-PBS沖洗細胞(T-25培養瓶中加3ml,T-75培養瓶中加5ml)。丟棄沖洗用的溶液。
3．將-EDTA(0.05%，0.53mMEDTA?4Na;T-25培養瓶
中加3ml，T-75培養瓶中加5ml)加到培養瓶中與細胞相對的一
側。搖動培養瓶幾次。丟棄所有溶液，只保留能夠形成一薄層液
膜覆蓋住細胞的-EDTA即可。在37℃下孵育細胞5-10分
鐘。孵育期間用顯微鏡觀測細胞。當細胞都變圓后，輕敲培養瓶
以使細胞離開瓶壁。
4．加入生長培養基(T-25培養瓶中加6ml,T-75培養瓶中加10ml) 使細胞懸浮。
注意：如果使用無胎牛血清培養基，應加入大豆抑制劑。通常使0.25mg/ml的抑制劑，按1：1(體積比)的比例加入即可抑制。
5．將細胞懸液轉移到一個15ml離心管中。用100Xg的速度離心4分鐘。吸去上清液(-EDTA與生長培養基的混合物)。
6．用5ml生長培養基重懸細胞。用100Xg的速度離心4分鐘。
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