膠原酶IV型細胞分離液

商品屬性：

商品介紹：

本品為IV型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特別適用于胰島組織的消化。

本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶，多糖酶，脂酶等，分別能夠有效水解結締組織和上皮組織細胞外基質內的其他蛋白、多糖和脂質，使得本品非常適用于組織消化。

膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現在膠原中，很少發現于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘an酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結締組織內。

目前商業化提供的細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向：

1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、yi蛋白酶活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備；

2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備；

3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備；

4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。

酶活力單位定義

在37℃，pH7.5 的條件下，5h內水解膠原產生相當于1μM L-亮氨的酶量定義為1個酶活力單位。

儲存條件：4℃避光，有效期兩年

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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