Percoll細胞分離液

商品屬性：

商品介紹：

Percoll是一種適用性廣且操作靈活簡單的低密度梯度分離液，可用來分離細胞，亞細胞顆粒，細菌，病毒，甚至實現受損細胞及其碎片與完整活細胞的分離。Percoll主要由表面包被單層乙烯烷酮（PVP）的硅膠顆粒組成，直徑15-30 nm，游離PVP的含量僅占1-2%。由于顆粒大小的異質化，離心過程以不同的速率沉淀，自發產生一個勻質化且等滲的梯度，密度在1.0-1.3 g/ml之間。大部分沉淀系數＞60S的生物顆粒都可以用Percoll實現分離。

本品是無菌的溶液，呈無色至淺黃色，具有以下幾大特點，

1）Percoll形成的梯度密度范圍在1.0-1.3 g/ml之間，整個梯度體系都是等滲的；

2）無細胞毒性，化學惰性，不會粘附到細胞膜上；

3）可調節至生理離子強度和pH；

4）溫和條件分離細胞，亞細胞顆粒和較大病毒（低至~70S），可保持其活力和形態完整性；

5）只需角轉頭中速離心即可實現預成梯度或者自發形成梯度分離；

6）Percoll粘度低（10±5 cP at 20℃），能夠快速形成梯度和顆粒分離；采用預制梯度分離低速離心力（200-1000×g）僅需數分至數十分鐘即可達到滿意的分離結果；

7）Percoll穩定性高，未開封的產品室溫保存5年有效；開封的產品室溫無菌保存至少2年有效；

8）Percoll（未稀釋）可重新高壓滅菌，120℃，30min；

儲存條件：4-30℃，有效期5年

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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