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貨號 | CS-C8765 | 貨期 | 1~3天 |
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規格 | 100mL|500mL | 英文名稱 | BeyoECL Star Kit For Western Blot |
用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品屬性:
貨號 | 規格 | 貨期 | 英文名稱 |
CS-C8765 | 100mL|500mL | 1~3天 | BeyoECL Star Kit For Western Blot |
商品介紹:
本試劑盒是一種用作Western螢光檢測試劑的特超敏ECL化學發光試劑盒,發光優于BalbECL Plus,可與二抗上偶聯的辣根過氧化物酶(HRP)發生化學反應,發出螢光,從而可以通過用X光片壓片或其它適當化學發光成像設備檢測樣品。
的BalbECL系列Western螢光檢測試劑目前共有三種,分別是YT060 BalbECL Plus、YT061 BalbECL Star和YTB061 BalbECL UT。常規的Western檢測,優先推薦使用BalbECL Star。對于豐度比較高的目的蛋白的檢測,例如內參蛋白等的檢測,推薦使用性價比更高的BalbECL Plus。對于低豐度較難檢測的目的蛋白,優先推薦使用檢測靈敏度高的BalbECL UT。但對于豐度適中的目的蛋白的檢測,不太推薦使用BalbECL UT,因為使用BalbECL UT時由于檢測靈敏度特別高,容易產生過曝的現象。
BalbECL Star靈敏度高,比DAB顯色的靈敏度至少高1000倍,比Amersham公司的ECL或以前生產的BalbECL的靈敏度高100-500倍左右,比我公司的BalbECL Plus的靈敏度高約5-10倍(參考圖1),比原Pierce公司(現Thermo公司)的SuperSignal West Pico Substrate的靈敏度高10倍以上,實際檢測效果與原Pierce公司的SuperSignal West Dura和SuperSignal West Femto的檢測靈敏度相近。對于辣根過氧化物酶的低檢測靈敏度可以達到飛克級,500fg辣根過氧化物酶用BalbECL Star檢測并用化學發光儀進行發光強度的定量檢測時,信噪比大于5。
保存條件:
4℃避光保存,一年有效。37℃避光保存,一個月有效。如果長期不用,可以-20℃避光保存。-20℃可以保存更長時間。
注意事項:
1.BalbECL Star A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭,A液和B液相互污染后會導致A液或B液逐漸失效,影響后續的使用效果。
2.各溶液使用后,請蓋緊瓶蓋,以防失效。特別是B液,含有氧化劑,比較容易被還原而失效。
3.BalbECL Star的螢光持續時間很長,但開始反應后的20-30分鐘內螢光更強一些,隨后螢光會逐漸減弱,因此請注意充分利用這螢光較強的30分鐘進行壓片。
4.當發現BalbECL Star的檢測靈敏度過高而影響檢測效果時,可以選擇檢測靈敏度較低一些的BalbECL Plus(YT060),或者減少樣品、一抗或二抗的用量。如果BalbECL Star的檢測靈敏度仍然不夠時,可以選擇檢測靈敏度更高的BalbECL UT(YTB061)。
5.BalbECL Star A液和B液均對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
6.本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
7.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
步驟和注意事項:?
準備實驗環境:?確保實驗區域清潔,?使用酒精清潔計數板和蓋玻片,?然后用吸水紙輕輕擦干。?
細胞培養:?
準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?
取出保存于低溫下的細胞苗,?并加入培養基中,?搖晃混合均勻。?
用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?
將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中,?定期更換培養液。?
細胞凍存與復蘇:?
細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中,?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度,?并在此溫度下對其長期保存的過程。?
復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程,?原則是“慢凍快融",?以較大限度地保存細胞活力。?
細胞計數:?
制備細胞懸液,?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞,?制成單個細胞懸液。?
在顯微鏡下,?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數,?細胞壓中線時,?只計左側和上方者,?不計右側和下方者。?
熒光顯微鏡使用:?
使用熒光染料對細胞進行染色,?并觀察細胞所發出的熒光信號,?以研究細胞結構和功能。?
聚合酶鏈反應(?PCR)?:?
準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?
按照PCR反應液配制表制備反應液。?
在反應器中加入反應液,?開始PCR反應。?
PCR反應的成功與否,?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?
轉染:?
準備轉染所需的載體DNA和細胞。?
制備轉染試劑,?將DNA載體溶解于轉染試劑中,?與細胞混合均勻。?
處理轉染細胞,?并進行下一步實驗。?
在操作過程中,?應注意實驗室安全規范,?避免隨意丟棄垃圾,?及時登記購買耗材或試劑,?保持實驗環境的清潔和安全
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