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022174抗生素檢定培養基2號(高pH)AntibioticAgarNo.2(highpH)用途：抗生素檢定培養基2號(高pH)用于、、、羅等效價及殘留的微生物學檢定(中華人民共和國藥典2010版)
022174 抗生素檢定培養基2號(高pH)
Antibiotic Agar No.2(high pH)
用 途：
抗生素檢定培養基2號(高pH)用于、、、羅等效價及殘留的微生物學檢定(中華人民共和國藥典2010版)。
原 理：
本法是利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用，抑菌圈直徑與抗生素的濃度或活性有關;比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種微生物學方法。
配方(每升)：
胨 6g
葡萄糖 1g
牛肉膏粉 1.5g
酵母膏粉 6g
瓊脂 15g
最終pH 7.9±0.1
使用方法(管碟法)：
1、稱取抗生素檢定培養基2號(高pH)29.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝三角瓶，115℃高壓滅菌30min。
2、雙碟的制備應在無菌室或潔凈室內進行，并注意避免微生物及抗生素污染。培養基應在水浴中或微波爐內融化，避免直火加熱。
3、雙碟的底層：用滅菌大口20mL吸管或其它滅菌分裝器，吸取已融化的培養基20mL注入雙碟內，待凝固后加入菌層。(雙碟內的培養基應均勻的分布于平皿內。)
4、菌層：取出試驗用菌懸液，按預試好的加菌量[能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18~22mm，三劑量法標準品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15~18mm]，用滅菌吸管吸取菌懸液適量，加入已融化并保溫在水浴中(水浴溫度：細菌為48~50℃，芽孢可至60℃)的培養基內，搖勻，作為菌層培養基使用。取出加有底層培養基的雙碟，用滅菌大口5mL、10mL吸管或其他適宜分裝器，吸取菌層培養基5mL，加于底層培養基上，使其均勻攤布，等凝固后放置鋼管。
5、放置鋼管：使用鋼管放置器或小子，使鋼管平穩的落在培養基上，相應劑量的鋼管 對角均勻放置。鋼管放妥后，雙碟靜置5~10分鐘后，再開始滴加抗生素溶液。
6、滴加抗生素溶液用滅菌毛細滴管或微量加樣器(調節加樣量約為200-300μL)，在滴加之前用溶液洗2~3次。滴加標準品及供試品溶液順序，因實驗設計方法不同而異。(2.2)法，在雙碟的4個鋼管中分別成“Z"字形滴加標準品及供試品高、低兩種濃度的溶液;在(3.3)法的6個鋼管中間隔3個鋼管中分別滴加標準品及供試品高、中、低3種濃度，并使相同濃度成對角。滴加溶液至鋼管口平滿。注意滴加時間溶液的間隔不可過長。
7、滴加完畢，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩置于雙碟托盤內，雙碟疊放不可超過3層，將雙碟托盤水平平穩地移入培養箱中間位置，在35~37℃或該藥品標準規定的溫度下培養至所需時間。
8、抑菌圈測量：測量前應檢查抑菌圈是否圓整，如有破圈或圈不圓整，應舍棄該碟。可用抑菌圈測量儀或游標卡尺測量。
質量控制：
本品在滅菌后應澄清無沉淀，下列菌株接種后35~37℃培養16~18h生長情況如下表：
貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。
規 格：250g
參考文獻：
1. 《中華人民共和國藥典》2010年版，附錄XI A 抗生素微生物鑒定法。
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