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一、目的
學習原代培養方法，從供體取得組織細胞后在體外進行的培養。
二、概述
組織塊培養法是常用的、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。可以采用剪切法，即將組織塊剪切成小塊后，接種于培養瓶，組織小塊貼壁24h或更長時間后，細胞就從組織四周游出。但由于在反復剪切和接種過程中對組織塊的損傷，并不是每個小塊都能長出細胞。用于組織塊培養的培養瓶可根據不同細胞生長的需要作適當處理，如預先涂以膠原薄層，以利于上皮樣細胞等的生長。（本節以新生牛主動脈平滑肌培養為例）
三、材料
（一） 儀器
1. 凈化工作臺
2. 恒溫水浴箱
3. 冰箱（4℃、-20℃）
4. 倒置相差顯微鏡
5. 培養箱
（二） 玻璃器皿
1. 培養皿（Φ100mm）
2. 吸管（彎頭）
3. 燒杯（500ml、200ml、10ml）
4. 廣口試劑瓶（500ml）
5. 玻璃瓶（250ml、100ml）
6. 培養瓶
7. 廢液缸
（三） 塑料器皿
1. 吸頭
2. 槍頭
3. 膠塞
4. EP管
（四） 其他物品
1. 微量加樣槍
2. 眼科組織剪（直尖、彎）
3. 眼科組織鑷（直、彎）
4. 12.5cm組織鑷（無鉤、1×2鉤）
5. 25cm敷料鑷（無鉤）
6. 止血鉗（18cm直紋式、12.5cm直紋式、彎紋式）
7. 解剖剪
（五） 試劑
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. RPMI1640
4. 雙抗（青霉素、鏈霉素）
5. 1N HCl
6. 7.4%NaHCO3
四、操作步驟
1. 取材：打開胸腔，無菌操作下取出主動脈胸段，浸到預先配制好的含雙抗（500u/ml青、鏈酶素）的D-Hanks液中漂洗。
2. 組織的沖洗、修剪：取出主動脈，用鋒利的剪刀修剪除去周圍組織，再用D-Hanks沖洗主動脈3次，除去血塊及雜組織等。
3. 平滑肌組織分離：縱向剖開主動脈，撕下主動脈內層，取主動脈中層的平滑肌組織，無血清RPMI1640漂洗3次。
4. 剪切：將平滑肌組織用鋒利的眼科剪反復剪切至剪成1mm3小塊，在剪切過程中，可以適當向組織中滴加1～2滴培養液，以保持濕潤。
5. 貼塊：將剪切好的組織小塊，用眼科鑷送入培養瓶內，用彎頭吸管將組織塊均勻擺置，每小塊間距0.5cm左右，組織塊放置好后，輕輕將培養瓶翻轉，讓瓶底朝上，向瓶內注入適量含10%牛血清培養液，蓋好瓶蓋。
6. 培養：將培養瓶瓶底朝上，37℃培養箱放置2～4h，待組織小塊貼附后，將培養瓶慢慢翻轉平放，靜置培養。
7. 換液：原代培養3～5d，需換液一次，去除漂浮的組織塊和殘留的血細胞。
組織塊培養法也可不用翻轉法，即在擺放組織塊后，向培養瓶內僅加入少量培養液，以能保持組織塊濕潤即可，蓋好瓶蓋，放置37℃培養箱24h再補加培養液。
注意事項
1. 取材的組織盡快培養。因故不能即時培養，可將組織浸泡于培養液內，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時間不能超過24h。
2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區域取材，可用含500～1000u/ml的青、鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養。
3. 組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠等。
4. 原代培養的1～2d內要特別注意觀察是否有細菌、霉菌的污染，一旦發現，要及時清除。
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