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DNA重組包括五個步驟：
（1）目的基因的獲取
獲取目的基因的方法主要有三種：
1.反向轉錄法：利用mRNA反轉錄獲得目的基因的方法。
2.從細胞基因組直接分離法：常用"鳥-槍法"，這種方法猶如用散彈打鳥,所以又稱"散彈槍法"。"鳥-槍法"分離目的基因，具有簡單、方便和經濟等優點，許多病毒和原核生物、一些真核生物的基因，都用這種方法獲得了成功的分離。
3.人工合成法：化學合成目的基因是20世紀70年代以來發展起來的一項新技術，應用化學合成法，可在短時間內合成目的基因。科學家們已相繼合成了人的生長激素釋放抑制素、胰島素、干擾素等蛋白質的編碼基因。
（2）DNA分子的體外重組
體外重組是把載體與目的基因進行連接。例如以質粒作為載體，首先要選擇合適的限制性內切酶，對目的基因和載體進行切割，再以DNA連接酶使切口兩端的脫氧核苷酸連接，于是目的基因被鑲嵌進質粒DNA，重組形成了一個新的環狀DNA分子（雜-種DNA分子）。
（3）DNA重組體的導入
把目的基因裝在載體后，把它引入受體細胞中；導入的方式主要包括轉化、轉導、顯微注射、微粒轟擊和電擊穿孔等方式，轉化和轉導主要適用于細菌一類的原核生物細胞和酵母這樣的低等真核生物細胞，其他方式主要應用于高等動植物的細胞。
（4）受體細胞的篩選
由于DNA重組體的轉化成功率不高，需要在眾多的細胞中把成功轉入DNA重組體的細胞挑出，應先找到特定的標志，證明是否導入成功。
（5）基因表達
目的基因在成功導入受體細胞后，其所攜帶的遺傳信息必須通過合成新的蛋白質才能表現出來，從而改變受體細胞的遺傳性狀。目的基因在受體細胞中要表達，需要滿足一些條件。例如，目的基因是利用受體細胞的核糖體來合成蛋白質，因此目的基因必須含有能啟動受體細胞核糖體工作的功能片段。
