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上海子實生物科技有限公司

普通細胞培養(yǎng)基配置

時間:2018-3-30閱讀:3684
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準備和安裝過濾器 
清洗好過濾器,干燥,放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜,用布包裝好,15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內(nèi)打開過濾器架好,膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中,出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾,過濾后要檢查濾膜是否完好無損。 

合成培養(yǎng)基的配制
1、根據(jù)細胞目錄中的說明,按下表選擇合適品牌及貨號的培養(yǎng)基干粉,用適量超純水充分溶解。 

培養(yǎng)基品牌貨號
D-MEM/F-12GIBCO12400024
Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM), powder (high glucose)GIBCO12800017
F-12 Nutrient Mixture (Ham) powderGIBCO21700075
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) powderGIBCO12200036
Leibovitz's L-15 Medium powderGIBCO41300039
McCOY's SIGMAM4892
Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEMα)
with ribonucleosides and deoxyribonucleosides
GIBCO11900024
Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEMα)
without ribonucleosides and deoxyribonucleosides
GIBCO12000022
Minimum Essential Medium (MEM) powderGIBCO41500034
NUTRIENT MIXTURE F12 HAM KAIGHN'S
MODIFICATION (F12K)
SIGMAN3520
RPMI Medium 1640GIBCO31800022
EGFSIGMAE9644
Sodium pyruvateSIGMAP2256-25G
MEDIUM 199, WITH EARLE'S SALTS AND L-GLUTAMINE, WITHOUT SODIUM BICARBONATE. CELL CULTURE TESTEDSIGMAM5017


2、 按要求添加*、*鈉、HEPES等,充分攪拌使之溶解。
3、 調(diào) pH至7.2左右。
4、 加水至zui終體積。
5、 在超凈臺中對溶液進行濾過除菌,分裝入250 mL或500 mL玻璃瓶中,用翻帽塞塞緊瓶口。
6、 瓶口封好,4℃冰箱貯存。 

小牛血清的處理 
市場上出售的小牛血清一般做了滅菌處理,但在使用前還應(yīng)做熱滅活處理,即通過加熱的方法破壞補體(近來也有觀點認為熱滅活處理是不必要的)。胎牛血清不必滅活。
1、 將血清加熱至56℃并保持30 min,其間要不時輕輕晃動,使受熱均勻,防止沉淀析出。
2、 處理后的血清貯存于4℃。
3、 小牛血清在使用前進行篩選以掌握血清的質(zhì)量。 

生長培養(yǎng)基的配制 
除無血清培養(yǎng)之外,各種合成培養(yǎng)基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。

  1. 培養(yǎng)基分裝成小瓶(100~200 mL)以便使用,翻帽塞塞緊瓶口。

  2. 按如下比例配制: 基本培養(yǎng)基占80%~90%,小牛血清或胎牛血清占10%~20%。 按1%體積分數(shù)加入雙抗貯存液(*+*),使*和*的終濃度分別為100 U/mL和100 μ/mL,。

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