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土壤酸性磷酸酶(soil acid phosphatase S-ACP)活性
測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
For Research Use only
僅供研究用
貨號(hào):QYS-235098
分光光度法 50 管/48 樣
注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
土壤磷酸酶是一類(lèi)催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 顯著影響,根據(jù)zui適 pH 范圍,通常分為酸性、中性和堿性三種類(lèi)型。
測(cè)定原理
酸性環(huán)境中 S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成*和*,通過(guò)測(cè)定酚的生成 即
算出 S-ACP 活性。
自備儀器和用品
見(jiàn)分光光度光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。
試劑組成和配制
N
粗酶液提取:
稱取風(fēng)化混勻土壤約 0.1g,加入 50µL 甲苯(自備),輕搖 15min;加 0.4mL 試劑一并且搖勻后,置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱,開(kāi)始計(jì)時(shí),催化反應(yīng) 24h;到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻, 以終止酶催化的反應(yīng)。8000g,25℃離心 10min,取上清液置于冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
1.分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.空白管:取1mL 玻璃比色皿,加入 50 µL 蒸餾水,100 µL 試劑三,20 µL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 830 µL,混勻后 25℃靜置 30 min,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 A空白管。
3.標(biāo)準(zhǔn)管:取1mL 玻璃比色皿,加入 50 µL 標(biāo)準(zhǔn)液,100 µL 試劑三,20 µL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 830 µL,混勻后 25℃靜置 30 min,于 660 nm 測(cè)定吸光度,記為 A標(biāo)準(zhǔn)管
4.測(cè)定管:取1mL 玻璃比色皿,加入 50 µL上清液,100 µL 試劑三,20 µL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 830 µL,混勻后 25℃靜置 30 min,于660 nm 測(cè)定吸光度,記為 A測(cè)定管。
注意 空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次
S-ACP 活性計(jì)算公式
N
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