土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase S-ACP）活性

測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

For Research Use only

僅供研究用

貨號(hào)：QYS-235098

分光光度法 50 管/48 樣

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 顯著影響，根據(jù)zui適 pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

測(cè)定原理

酸性環(huán)境中 S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成*和*，通過(guò)測(cè)定酚的生成 即

算出 S-ACP 活性。

自備儀器和用品

見(jiàn)分光光度光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

試劑組成和配制

N

粗酶液提取：

稱取風(fēng)化混勻土壤約 0.1g，加入 50µL 甲苯（自備），輕搖 15min；加 0.4mL 試劑一并且搖勻后，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，開(kāi)始計(jì)時(shí)，催化反應(yīng) 24h；到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻， 以終止酶催化的反應(yīng)。8000g，25℃離心 10min，取上清液置于冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1.分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.空白管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL 蒸餾水，100 µL 試劑三，20 µL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 830 µL，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A空白管。

3.標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL 標(biāo)準(zhǔn)液，100 µL 試劑三，20 µL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 830 µL，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A標(biāo)準(zhǔn)管

4.測(cè)定管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL上清液，100 µL 試劑三，20 µL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 830 µL，混勻后 25℃靜置 30 min，于660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A測(cè)定管。

注意 空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次

S-ACP 活性計(jì)算公式

N

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