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雞 D-乳酸(D-LA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定雞血清,血漿,組織及 相關(guān)液體樣本中 D-乳酸(D-LA)的含量。
D乳酸(D-LA)試劑盒實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞 D-乳酸(D-LA)水平。用純化的雞 D-乳酸(D-LA) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 D-乳酸(D-LA),再與 HRP 標記的 D-乳酸(D-LA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏 色的深淺和樣品中的 D-乳酸(D-LA)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中雞 D-乳酸(D-LA)濃度。
D乳酸(D-LA)試劑盒樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上 清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心
20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次 離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程 中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞 濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器 將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待 檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
D乳酸(D-LA)試劑盒計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋 倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
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