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雞 D-乳酸(D-LA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2018-1-16閱讀:483
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  雞 D-乳酸(D-LA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測(cè)定雞血清,血漿,組織及 相關(guān)液體樣本中 D-乳酸(D-LA)的含量。

D乳酸(D-LA)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:

應(yīng)測(cè)標(biāo) D-(D-LA) D-(D-LA) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 D-乳酸(D-LA),再與 HRP 標(biāo)記的 D-乳酸(D-LA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏 色的深淺和樣品中的 D-乳酸(D-LA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 過(guò)標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn)計(jì) D-(D-LA)

 

D乳酸(D-LA)試劑盒樣本處理及要求

1.  血清 10-20  20 2000-3000 轉(zhuǎn)/細(xì)清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心

20 右(2000-3000 轉(zhuǎn)/細(xì)過(guò)程應(yīng)該再離心。

3.  尿無(wú)集, 20 2000-3000 轉(zhuǎn)/細(xì)保存過(guò)中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/ 細(xì)收上清檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)成份時(shí) PBSPH7.2-7.4釋細(xì)懸液細(xì)濃度達(dá)到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 2000-3000 轉(zhuǎn)/細(xì)過(guò)應(yīng)

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?標(biāo)本仍然 2-8℃的度。定量 PBSPH7.4手工漿將標(biāo)本勻漿充分。離 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清。分裝后一份檢測(cè),其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上 進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

D乳酸(D-LA)試劑盒計(jì)算:

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo), 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋 倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的 OD 值 代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

 

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