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提高染色體顯示的措施

時間:2015-11-18閱讀:289
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(一)原理

    顯示染色體主要是顯示分裂中期細胞。因細胞分裂處于中期時,染色體的長短和大小恰到好處,是研究染色體的階段。所以,*需要獲得多量的中期分裂象;第二·人類染色體有46條,密集在細胞中,相互交錯纏繞,必須把它們分散開,才便于觀察。

(二)提高染色體顯示的措施

1.提高細胞分裂象數

(1)刺激細胞增殖:大多數培養細胞群在指數增生期時,細胞分裂指數在1%~5%;其中二倍體細胞和初代培養細胞較低,平均1%~2%,傳代細胞系,尤以永生性轉化細胞系和腫瘤細胞系等較高,可達3%~5%。另一些如初代淋巴細胞培養則很少出現分裂,為此常采用刺激細胞增殖措施。刺激淋巴細胞增殖主要用PHA,白菜豆(phaseolus vulgaris)中提取,有商品出售,PHA分P和M兩型,M型作用較強。PHA特別適用于外周血淋巴細胞培養,有強烈的刺激T淋巴細胞增殖的作用,用量每10 ml培養液加PHAO.2ml.

(2)阻抑中期分裂

1)秋水仙素法:處于指數增生期的培養細胞分裂雖然活躍、分裂象數量較多,但做分析用尚顯不足。主要原因是,分裂象雖多,但并不同步,都處于分裂各不同期,其中處于分裂中期的細胞數并不很多。應用秋水仙素作用能顯著提高中期分裂象數(或用其衍生物秋水仙胺,秋水仙胺作用比前者強10倍)。秋水仙素有特異抑制紡錘絲蛋白合成作用,能阻抑分裂中期活動,而對DNA作用較小,借此可截獲很多中期分裂象,產生類似提高分裂指數的效應。該藥有強烈的毒性,用量過大或作用時間過長,可使染色體縮短和發生異常分裂現象。一般用量:秋水仙素O.02~0.8μg/ml營養液;秋水仙胺0.(902~O.08μg/ml營養液,作用時間2~6h。

2)低溫處理:把指數生長期細胞放置到室溫或冰箱中4℃4~12h,因溫度降低時DNA合成受抑制,細胞不進入分裂期,當恢復用37℃溫箱培養并用秋水仙素后,會出現代償性分裂高潮,也產生提高分裂象數效應。

2.促染色體分散措施

(1)低滲處理:應用低滲鹽溶液處理,可使細胞體積脹大、染色體松散,便于制備染色體標本。低滲可用蒸餾水、1%*、加水稀釋培養液(1:3)、O.075M KCl等方法。目前zui多用的是0.075M KCl,在37℃水浴中作用20~40min,效果。

(2)醋酸固定:大多數固定劑都使組織細胞收縮,而醋酸卻有膨脹固定作用,和醇類混合固定有利于染色體松散效應。現多應用醋酸/甲醇(1:3)混合液固定,用時宜現用現配。

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