體外培養的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續。培養的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭，將培養的細胞分散，以1：2或1：3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養。細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，細胞倍增3～6次。細胞傳代后，一般經過j個階段：游離期、指數增生期和停止期。

一、材料

1．標本80％或接近匯合成片的細胞。

2．試劑硝化液、PBS、培養液。

3．器具吸管、離心管、培養瓶、*。

二、操作步驟

1．在超凈工作臺中吸出培養瓶內的培養液。

2．加入少許消化液，以液面覆滿平底為宜，輕輕搖動培養瓶，消化液鋪滿所有細胞表面。

3．如果在倒置鏡下觀察被消化的細胞，細胞質回縮，細胞變圓，細胞間隙增大，立即終止消化。

4．吸出消化液，加入3～5ml新鮮培養液，用吸管反復吹打瓶壁上的細胞，吹打時要按順序進行，以確保所有瓶壁均吹打到，吹打時動作要輕柔，不要用力過大，盡可能不要出現泡沫，以避免細胞的機械損傷，制成細胞懸液。

5．用計數板計數，計算細胞的濃度，用培養液調整適當的細胞濃度后再分瓶培養。一般情況，傳代后的細胞在2h左右就能附著在培養瓶壁上，2～4d就可在瓶內形成單層，需要再次進行傳代。