猴胚胎腎上皮細胞(marcl45)
細胞用途:僅供科研使用。
細胞特性
1)來源:腎
2)含量:>lxl06 個/mL
3)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
4)規格:T25瓶或者lmL凍存管包裝運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
猴胚胎腎上皮細胞(marcl45)
細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備:
1.準備 D/F12 培養基(D/F12, GIBCO,貨號 C11330500BT);北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,貨號 16000-044),10%;雙抗 1%。
2.培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
2)細胞處理:
1.復蘇細胞:將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養基后吹句。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養,加培養基至6ml。
2.細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
猴胚胎腎上皮細胞(marcl45)
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口 lm丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于3C培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2ml*培養基終止消化。
輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加l-2mL培養液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。3.細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO迅速混勻,按每lml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便次拿取。
注意事項:
收到細胞后,若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。?