免疫分析，比如ELISA試劑盒，一般包含兩個或以上的孵育進程，中心以洗刷離隔。ELISA一般在96孔板中展開，其上包被了結合抗原或抗體。在封閉進程后，包被后的平板首要與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗刷進程去除未結合（低親和力）的抗原-抗體復合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復合物結合。之后，又是一輪洗刷。畢竟是增加底物并檢測信號。

我們可運用多種底物來檢測畢竟的抗原-抗體復合物。底物分為三類：天然發光、化學發光和熒光。準確說來，ELISA這個詞指的是運用天然發光底物的分析。而運用化學發光底物的分析被稱為Luminescent Immunoassay（LIA），運用熒光二抗的分析被稱為Fluorescent 

優化ELISA的關鍵之一在于洗刷。洗刷進程可下降未結合抗體所引起的布景信號，然后增加分析的信噪比。每一步之間的洗刷保證只需特異的結合事情被保存，在畢竟一步發作信號。而不充分的洗刷會導致差異和高布景，然后帶來不志向的效果。本文將為你介紹一些運用自動洗板機來洗刷ELISA平板的技巧。

洗刷參數
一些參數會影響洗刷進程的效果。*個首要的參數是洗刷量。自動洗板機會分配洗刷液。如果你之前遭受過高布景，那么不要猶疑，將洗刷量調為高，是比包被體積更高。太少的洗刷液會讓一部分分析表面洗刷不到，然后明顯增加布景。全部反應孔的洗刷量有必要相同。ELISA板的制造商一般會在試劑盒的運用手冊中列出包被量。工作中一般運用的包被量是200 µl。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會建議運用300 µl進行洗刷，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗刷量越高，則孵育進程殘留的抗體或抗原量就越少。

洗刷次數的閱歷規律
ELISA試劑盒第二個影響洗刷效果的首要參數是洗刷循環的量。當然，洗刷次數越多，布景越低。可是，太多次的洗刷會下降信號強度，使其難以測定。一般的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗刷三次。不過，ELISA板的制造商會對洗刷次數提出建議。一般而言，制造商包被平板需求的洗刷次數比用戶包被的平板要少。關于用戶包被的ELISA板，有必要優化洗刷次數。

控制洗刷量和洗刷次數的另一種方法是參加過量的洗刷液。一般來說，96孔板的每個孔能包容330至460 µl。不過，有些自動化洗板機可設置程序，分配遠遠超出這個量的洗刷液，比如1 ml。它是怎樣做到的呢？其實很簡單，就是在分液的一起翻開吸液功用。換句話說，跟著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術能增加洗刷量，但不會溢出到其他孔中。

其他，還有一些參數會影響洗刷進程的效果。這些參數包含吸液高度和吸入方位，這兩者都能調整，以下降布景（殘留量）和差異。殘留液體中包含未結合的抗原或抗體，它們會增加布景信號。殘留量越小，殘留液體越少，轉移到下一步的煩擾液體也就越少。

吸液高度會明顯影響殘留量；如果洗刷吸頭與反應孔底部的間隔稍大，那就會讓殘留量急劇增加。反之，如果洗刷吸頭壓著反應孔底部，那么也會使吸液功率下降，殘留量增加。
現在的洗板機一般運用兩種類型的洗頭：剛性和起浮的。起浮洗頭中的吸頭可在洗刷進程中安閑上下移動，而剛性洗頭則固定在恰當的方位。運用剛性洗頭的洗刷操作在優化起來更為凌亂，因為你需求非常仔細地調整吸液高度。如果你們實驗室運用幾種不同的板，那可能會很耗時。在運用起浮洗頭時，吸頭會降到反應孔的底部。調整高度就不是很重要，因此洗頭會下降到底部。

抽吸的方位也對殘留量有著重要影響；如果每個孔只運用一個抽吸點（這很常見，因為更快），那么抽吸的方位需求優化。的方位取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應孔的中心，即便這是全部洗頭zui常見的默許方位。一般來說，方位在孔中心與孔壁之間的某處。
反應孔的形狀也會影響殘留量。C形底（平底圓角）的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。

如果沒有自動洗板機，選用手工洗刷，那么也需求注意幾點。運用8道或12道微量移液器，選用倒吸的方法進行洗刷；不同廠家的洗液不宜互相混用。洗板時需保證微孔板平放，將洗刷液注滿各孔，但盡量避免漏液，以每孔300 µl為宜；板洗次數一般為3次，要保證洗板的浸泡時間，每次浸泡時間一般為30-60 秒；盡量減少洗液殘留量，舉薦每次洗板后進行決議，并及時替換吸水紙，避免吸水紙的碎屑粘到反應孔內。
ELISA試劑盒看起來很簡單，可是在實際操作進程中，也不能掉以輕心，仍是應該仔細查看洗刷進程，才華取得準確的效果。