ELISA試驗的原理好像很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關閉。可是，即使是平鋪直敘的洗刷和關閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個試驗。在試驗結束時，我們是否能取得有意義的信息，ELISA試劑盒這在很大程度上取決于成果的信噪比。ELISA試劑盒布景噪音會影響您對成果的判斷。怎么下降ELISA的布景，上海酶聯生物研究所教你辦法。

一、洗刷很重要

1. 洗刷過程看似很無聊，其實很重要，由于如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會阻撓非特異結合反響。如果布景過高，而您置疑洗刷不行時，能夠測驗添加洗刷次數。

關閉更重要

2. 關閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就下降了可發作信號的抗體非特異結合的時機。您當然也期望抗體只與意圖蛋白結合吧。如果您的布景過高，置疑關閉不充分，那么您能夠測驗運用更高濃度的關閉液，或恰當延長關閉時刻。

如果您一直被布景問題所困擾，那么或許您該花些時刻來優化關閉液。這可能需求時刻，但也是值得的。現在主要有兩種類型的關閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運用的類型須取決于多個要素，包含微孔板的外表試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的關閉液應下降非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發作相互作用。

3. ELISA試驗zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關閉液廉價、安穩，在去除洗刷過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用，ELISA試劑盒由于很簡單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要添加關閉液。請勿運用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會下降特異結合，發作假陰性。另一個挑選是運用蛋白和非離子型去污劑這兩種關閉液，后者可協助洗刷過程中的關閉。

4. 蛋白關閉液則有所不同，是*的。它們與敞開位點結兼并關閉，一起安穩與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白關閉液包含牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有用阻攔許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個問題的一種辦法是運用雞或魚的正常血清。

二、抗體濃度須優化

ELISA試驗我們通常會follow師兄師姐留下來的操作過程，ELISA試劑盒可是如果試劑稍有不同，則可能需求優化抗體的量。記住，非特異的抗體結合會添加布景。為了避免這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。

三、檢測試劑要適量

另一點也很清楚明了：切勿運用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應參加停止液。

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