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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA各環(huán)節(jié)中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

時(shí)間:2017-5-11閱讀:223
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首要從事小鼠ELISA試劑盒,放免法試劑盒,動(dòng)物血清,培養(yǎng)基報(bào)價(jià),植物elisa試劑盒 細(xì)菌培養(yǎng)基 金標(biāo)試劑盒 抗生素標(biāo)準(zhǔn)品,首要商品有:ELISA試劑盒、PCR試劑盒、金標(biāo)試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)品等。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的運(yùn)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的查看效果影響較大,如不注意,有或許致使顯色不全、花板等效果。
上海酶聯(lián)生物將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的要素及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來(lái)一些啟示,前進(jìn)試驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa試驗(yàn)操作中或許影響效果的要素,并給出相應(yīng)的解決辦法
選擇試劑

選擇質(zhì)量?jī)?yōu)異的查看試劑,嚴(yán)峻按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
一、加樣
或許要素:
1)血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中,加樣板過(guò)多構(gòu)成加樣后放入孵箱前等候時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法:
標(biāo)本為血清:將血液先天然寄存1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管,采血后有必要當(dāng)即倒置*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)查看,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 ELISA試劑盒加樣后及時(shí)放入孵箱。加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。  假如選用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
二、 孵育
或許要素:
孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清潔*; 孵育時(shí)間人為延伸,致使非特異性緊附于反響孔周圍,難以清潔*。
解決辦法:
 貼封片或加蓋;  按說(shuō)明進(jìn)程嚴(yán)峻操控操作時(shí)間。
三、洗板
或許要素:
選用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量缺少,致使洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,致使洗板效果差。  反響板過(guò)多構(gòu)成洗板等候時(shí)間長(zhǎng)。
解決辦法:
保證洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(選擇潔凈、無(wú)或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
四、顯色
或許要素:
顯色劑制作后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或運(yùn)用過(guò)期顯色劑; 加顯色劑時(shí)濺起孔外構(gòu)成液體回流。 顯色劑盡量在臨用前制作,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 加樣時(shí)堅(jiān)持顯色劑不外流; A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)異試劑外,ELISA試劑盒有必要嚴(yán)峻按照操作進(jìn)程進(jìn)行操作,一起作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以慎重的工作作風(fēng)查看每一份標(biāo)本,才華保證查看質(zhì)量。如今國(guó)內(nèi)已有恰當(dāng)數(shù)量的單位具有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于完結(jié)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化查看、前進(jìn)查看質(zhì)量起到了重要效果。

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