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在ELISA中除了包被外,一般需進行4-5次加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性,例如規(guī)則為加樣一滴。此時應該運用相同口徑的滴管,堅持準確的加樣姿態(tài),使每滴液體的體積底子相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結合物的稀釋液應按規(guī)則制造。加樣時應將液體加在孔底,避免加在孔壁上部,并留心不可出現(xiàn)氣泡。
ELISA中加樣須留心如下問題:
1. 汲取樣品時,加樣槍吸頭不應黏附剩余的液體;加樣時不可90度向孔中滴加液體,這樣會導致液體殘留在吸頭上,加樣不準確!
2. 不要將吸頭伸入孔中,一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,另一方面可能會將孔中的液體吹起來,加樣不準確!
正確的加樣方法應為45度,吸頭貼著孔壁參與,應留心:
1. 角度太小,會使液體殘留在孔壁上,導致加樣不準確!
2. 吸頭應當貼著管壁和液面的交界處
運用微量加樣器加樣有必要留心的要害點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺起和發(fā)作氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導致非特異吸附。濺起會對鄰近孔發(fā)作污染。出現(xiàn)氣泡則反響液界面有差異。試劑的參與在國產試劑盒中底子上均是從滴瓶中滴加,除了要留心滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很簡單出現(xiàn)重復滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,然后引起非特異顯色。
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