1．elisa試劑盒樣品稀釋 一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量實驗斷定,以確保實驗的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反響是一種敏感性很高的反響,如果血清不稀釋,不行防止會發(fā)生很強(qiáng)的非特異性反響,呈現(xiàn)假陽性.

2．試劑盒平衡Elisa中一切試劑和板條均應(yīng)在實驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時刻太短會形成試劑混勻不行,樣品孵育時刻相對縮短,ELISA反響不行充沛.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

3．樣品和試劑的混勻 在稀釋前、后的樣品有必要充沛混勻,一切試劑在加樣前也須搖勻,以確保實驗的均一性.

4．加樣加樣是一項很重要的過程.加樣不行太快,要防止加在孔壁上部,不行濺出和發(fā)生氣泡.加樣太快,無法確保微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.

5．溫育溫育是elisa試劑盒測定中影響測定勝敗zui為要害的一個要素.ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反響在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,有必要在必定的溫度條件下反響必定的時刻.

6．洗板固相免疫測定技能是一種非均相免疫測定技能,需以洗刷操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反響溫育過程中吸附的非特異成份別離開來,以確保ELISA測定的特異性.洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,必定要大力拍干；及時替換吸水紙,尤其是拍過酶符號物的吸水紙必定要棄去,否則可能影響實驗成果.

7．顯色顯色必定要控制時刻,依據(jù)試劑盒闡明操作即可.一般來說,顯色時刻過短,成果偏低；顯色時刻過長,空白增高或許非特異性顯色添加.

8．elisa試劑盒比色要注意波長的選擇.以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有運用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需依據(jù)要求隨時替換.因此,簡單呈現(xiàn)濾光片錯用的問題.