ELISA試劑盒zui常用的標本是血清，血漿通常可視為與血清同等的標本，標本致使的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質所形成的，分為內源性物質和外源性物質兩種：
內源性物質有人以為大概40%的人血清標本中含有非特異性攪擾物質，能夠不一樣程度影響檢查成果。
多見的攪擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig （s）抗體、穿插反響物質和等。 
（1）類風濕因子 人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接，然后致使假陽性。
處理該情況的方法是：
①用F（ab）2代替完好的IgG；
②標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG參加到標本稀釋液中同樣有效）；
③檢查抗原時，能夠用2-巰基乙醇等參加到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體 ELISA體系中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發作變構，其FC段的補體C1q分子位點被露出出來，使C1q 能夠將二者連接起來，然后形成假陽性。
ELISA試劑盒處理的方法是：
①用EDTA稀釋標本；
②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig （s） 的天然嗜異性抗體，可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來，也能形成假陽性。
處理的方法是：
可在標本稀釋液中參加過量的動物Ig （s） ，但參加量缺乏或亞類不一樣時無效。
也含親水基團，其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵，然后削弱蛋白質與固相載體的，并借助于親水基團和水分子的效果，使蛋白質回復到水溶液狀態，然后脫離固相載體。
洗滌液中的非離子型洗滌劑通常是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實驗的靈敏度。
洗液需求稀釋，應按要求稀釋。制造洗液使用新鮮的和高質量的純化水，電導率小于1.5μs/cm，ELISA試劑盒洗液假如結晶應待其融解后制造。
手洗條件一致性較差，對成果影響較大，避免洗液在孔內形成氣泡。
半自動與全自動冼板機使用不當也會影響成果，血清中殘留的的纖維蛋白絲或洗滌液分出的結晶易使洗板機針小孔全堵塞或半堵塞狀態，形成未符號酶洗脫不*，致使“花板”形成假陽性或假陰性；
ELISA試劑盒操作洗板機過程中要不時調查洗板機針孔內洗液的曉暢情況，及時糾正，洗板機不用時使用去離子水清冼幾遍。