脂肪酸代謝_酰基轉移酶AAT測試盒_微量法
測定方法：微量法
產品規格：100管/96樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種酰基化和去酰基化反應，在基因表達、代謝和信號傳導中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
脂肪酸代謝_酰基轉移酶AAT測試盒_微量法
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1.組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3.液體：直接檢測。
AAT測定操作：
1、分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入18mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入10μL提取液和180μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入10μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入10μL樣本和180μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入10μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管。△A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
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