乙酰CoA(Acetyl-CoA)測試盒_三羧酸循環
測定方法:分光光度法
產品規格:10管/9樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
乙酰CoA廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。是生物體能源物質代謝過程中產生的一種重要的中間代謝產物。在體內能源物質代謝中是一個樞紐性的物質。糖、脂肪、蛋白質三大營養物質通過乙酰CoA匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環和氧化磷酸化,經過這條通路*氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于ATP合成。此外,乙酰CoA是合成脂肪酸,酮體及其衍生物等生理活性物質的前體物質。
乙酰CoA(Acetyl-CoA)測試盒_三羧酸循環
測定原理:
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰CoA和草酰乙酸生成檸檬酸和CoA。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯反應,乙酰CoA含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反應了乙酰CoA含量的高低。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存。臨用前加入100μL試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:液體4μL×1支,4℃保存。臨用前加入100μL試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加入9mL試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑五:液體10mL×1瓶,4℃保存。
工作液的配制:臨用前請根據擬用工作液體積(樣本數×0.92 m L),將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻(可以測定9樣);加樣前置37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴鍋中預熱30 min;現配現用;
乙酰CoA的提取:
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。