線粒體檸檬酸MCA含量測試盒_三羧酸循環系列
測定方法：分光光度法
產品規格：50管/48樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
CA是線粒體三羧酸循環的個中間產物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環強度的主要指標之一。
配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，（3）乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環進行狀況。
線粒體檸檬酸MCA含量測試盒_三羧酸循環系列
測定原理：
CA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進一步與苯肼反應，生成相應的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。
自備儀器和用品：
分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入15mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存。
標準品：液體1mL×1支，10μmol/mL檸檬酸標準液，4℃保存。
線粒體中檸檬酸提取：
稱0.05~0.1g樣品（建議稱0.1g樣本），加入0.5mL酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃離心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃離心10min，棄上清（取300μL該上清液和300μL堿性提取液中和后可用于細胞質CA含量測定）；沉淀即線粒體，向沉淀中加入0.5mL酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），取此溶液300μL和300μL堿性提取液中和，混勻，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定）。
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