線粒體蘋果酸脫氫酶MDHm測試盒_三羧酸循環
測定方法：分光光度法
產品規格：50管/48樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質和線粒體中。
線粒體蘋果酸脫氫酶MDHm測試盒_三羧酸循環
測定原理：
MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體10mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1mL×1支，-20℃保存；
試劑四、液體50 mL×1瓶，在4℃保存；
試劑五、粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入300μL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑六、粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入300μL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
樣本測定的準備：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿液于600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的MDH（此步可選做）。
⑤在步驟④中的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體MDH測定。
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