氨基酸代謝系列_半胱-氨酸(Cys)含量測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
蛋白質含有三種含硫氨基酸:甲-硫氨酸、胱-氨酸和Cys。其中,Cys是唯-一一種含有巰基的含硫氨基酸,從甲硫-氨酸轉化而來,并且可與胱-氨酸互相轉化。Cys參與蛋白質二硫鍵的形成,經常是蛋白質活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,并且補充巰基,以維持皮膚的正常代謝,調節表皮下層的色素細胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。
氨基酸代謝系列_半胱-氨酸(Cys)含量測試盒
測定原理:
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍,在600nm處有吸收峰;通過600nm吸光度,計算Cys含量。
自備儀器和用品:
低溫離心機、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、85%磷酸和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。用前1天,向試劑三中加2.5mL蒸餾水充分溶解,再加85%磷酸0.625mL,混勻后蓋緊(防止水分散失)沸水浴2h;冷卻后加10mL蒸餾水,4℃可保存2周。
標準品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標準液,4℃避光保存。用不完的試劑4℃可保存3天。
半胱-氨酸提取:
1、液體樣品中半胱-氨酸提取:取0.1mL液體樣品,加試劑一0.9mL,充分混勻,8000g
4℃離心10min,取上清液,待測。
2、組織中半胱-氨酸提取:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10 min,取上清液待測。
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待