花青素合成_4香豆酸輔-酶A連接酶4CL測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
4CL 是連接苯丙酸途徑與木質素特異合成途徑的關鍵酶,主要催化肉桂酸生成相應的肉桂酸輔酶 A 酯,是合成木質素與其他苯丙烷類化合物的代謝流向調控點。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量而提高其品質提供依據。
測定原理:
4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA,在 333nm 下測 4-香豆酸 CoA 生成速率,即可反映 4CL 活性。
花青素合成_4香豆酸輔-酶A連接酶4CL測試盒
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 25 mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;
粗酶液提?。?/p>
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。