還原糖含量測試盒_糖代謝系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/24樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。植物體內的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等,是常見的單糖和雙糖,其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物,也是進一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。
還原糖含量測試盒_糖代謝系列
測定原理:
加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內,還原糖含量與540nm吸光度成線性關系,根據標準曲線,即可求出樣品中還原糖的量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:15mL×1瓶 ,4℃保存;
樣品中還原糖的提取:
1、細菌或細胞的處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復30次),轉移到有蓋離心管中(防止加熱時水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測定用。
2、組織的處理:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.2g組織,加入2mL試劑一),冰浴勻漿,轉移到有蓋離心管中(防止加熱時水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測定用。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(mL):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議取0.2mL血清(漿)加入2mL試劑一),冰浴勻漿,轉移到有蓋離心管中(防止加熱時水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測定用。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、調節水浴鍋至95℃。