葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒_糖代謝系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等動物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖生產中使用GCDH,不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結合生成的葡萄-糖酸鈣是一種理
想的補鈣制劑。因而,GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。
葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒_糖代謝系列
測定原理:
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下測定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體47.5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
樣本的前處理:
組織的前處理:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
細菌或培養細胞的前處理:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零;
2、工作液的配制:臨用前將試劑二轉移到試劑一中混合溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
3、將工作液置于37℃預熱5分鐘。
在1mL石英比色皿中加入50μL樣本和950μL工作液,立即混勻,記錄340nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。