蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒_微量法
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化合成熊果苷,具有很好的美白效果,在化妝品工業中具有重要應用。
蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒_微量法
測定原理:
SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率,即可計算SP活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1支,-20℃避光保存,臨用前加2.5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:粉劑×1支,-20℃避光保存,臨用前加5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。