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江蘇綠葉生物科技有限公司

定位全基因組范圍DNA修復的新方法

時間:2015-5-8閱讀:118
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研究人員近日開發出一種全基因組范圍的測序分析,可定位DNA切除修復。

這項研究在60億個堿基對中,挑選出一個位點,我們將告訴你它是如何修復的。

當紫外線(UV)或其他一些物質造成基因組損傷時,此位點的一些DNA片段被切下,隨后與TFIIH蛋白結合。利用與酶結合的抗體,研究人員能夠分離出DNA片段-蛋白質復合物,并將它們拉出細胞,進行測序。然后研究人員能夠將片段定位回基因組中,顯示DNA修復發生在哪個位置。

據研究人員介紹,對于細胞中兩種類型的UV誘導損傷:環丁烷嘧啶二聚體(CPD)和(6-4)嘧啶-嘧啶酮光產物((6-4)PPs),XR-seq能夠產生核苷酸分辨率的修復圖譜。他們發現,在野生型細胞中,CPD修復是與轉錄高度相關的,特別是模板鏈。

研究表明,細胞中不編碼蛋白質的DNA調控區域也被修復。如果它們被修復,那么它們可能是很重要的。如今,我們正在尋找它們在整個基因組中的位置。

此外,研究人員表示,這種分析也能發現癌細胞中修復DNA損傷的特定機制。他們在文中寫道,XR-seq以及所產生的修復圖譜將有助于研究基因組位置、染色體背景、轉錄和復制對DNA修復的影響。

這項研究詳細介紹了利用測序方法來檢測DNA中的雙鏈斷裂,包括基因組編輯的核酸酶所產生的。這種被稱為GUIDE-seq的方法利用一種短雙鏈寡核苷酸來標記CRISPR-Cas誘導的脫靶斷裂,測序這些標簽所在的基因組區域,就能夠確定脫靶突變的位置。

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