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江蘇科特商貿有限公司

細胞轉染技術---瞬時轉染和穩定轉染

時間:2015-5-7閱讀:364
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    細胞常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(*轉染)。

    瞬時轉染(transient transfection)是將DNA導入真核細胞的方式之一。在瞬時轉染中,重組DNA導入感染性強的細胞系以獲得目的基因暫時但高水平的表達。轉染的DNA不必整合到宿主染色體,可在比穩定轉染較短時間內收獲轉染的細胞,并對溶解產物中目的基因的表達進行檢測。

    穩定轉染(*轉染)是用于建立克隆的細胞系,這種細胞系中轉染的目的基因整合到染色體DNA中并指導適量目的蛋白的合成。一般來說(由細胞類型決定),形成穩定轉染細胞的效率比瞬時轉染(transient transfection)的效率低1到2個數量級。利用可選擇的遺傳標記物有利于從非轉染細胞的中分離出的穩定轉染物。

    前者外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA 轉染效率較高,在轉染后24-72 小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β 半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染,外源DNA 既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA 比超螺旋DNA 轉入量低但整合率高。 外源DNA 整合到染色體中概率很小,大約1/104 轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如氨丙基轉移(APH;*抗性基因),潮霉素B 磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優化DNA 與轉染試劑比例,細胞數量,培養及檢測 時間等。一些傳統的轉染技術,如DEAE 右旋糖苷法,磷酸鈣法,電穿孔法,脂質體法各有利弊。







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