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GAPDH (甘油醛-3-磷酸脫氫酶) 是參與糖酵解的一種關鍵酶,由4個36 kDa 的亞基組成。除參與糖酵解外,有證據表明哺乳動物細胞中的GAPDH參與了多種胞內生化過程,包括膜融合 (membrane fusion)、微管成束 (microtubule bundling)、磷酸轉移酶 (phosphotransferase)激活、核內RNA出核、DNA復制與DNA修復等。GAPDH蛋白幾乎在所有組織中都高水平表達,常用于Western Blot檢測中校正系統(tǒng)的內參。
Tubulin即微管蛋白,是細胞的一種骨架蛋白。Tubulin分為α、β、γ、δ、ε等多種tubulin,其中Alpha Tubulin和Beta Tubulin可以形成異源二聚體,是形成微管的zui主要的兩種Tubulin。Alpha tubulin和Beta tubulin分子量分別為55kDa和50kDa,其實際檢測條帶均在55kDa左右。作為內參,alpha tubulin的蛋白水平通常不會發(fā)生改變,因此被廣泛用于Western Bloting時上樣量是否一致的參照,也常被用于免疫染色觀察細胞的微管結構。需要注意的是,在脂肪細胞內,alpha tubulin的表達量較少。
Actin是細胞骨架的主要成分,廣泛表達于真核細胞。目前發(fā)現(xiàn)Actin至少存在6種異構體形式,主要分布在心肌、骨骼橫紋肌和平滑肌組織中,調控細胞的收縮能力,也表達于非肌肉細胞,調節(jié)細胞結構和活力。β-Actin分子量為43 kDa,具有高度保守性,在細胞中的表達相對穩(wěn)定,因此它常被用于校正系統(tǒng)的內參。
內參抗體包括beta-actin、beta-Tubulin、GAPDH等,性能穩(wěn)定,質量可靠,可長期穩(wěn)定儲存,可在進行Western blot實驗時檢測目的產物、校正上樣誤差,也可作為空白對照,檢測蛋白轉膜是否*、整個顯色或者發(fā)光體系是否正常。
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