乳酸菌套裝生化鑒定管9 種（GB4789）

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16、葡萄糖酸鹽的氧化
假單胞菌屬和腸道桿菌科的細菌，可氧化葡萄糖酸為2－酮基葡萄糖酸。葡萄糖酸無還原性基團，氧化后形成酮基，則可將斐林氏試劑的呈藍色的銅鹽還原為磚紅色的Cu2O沉淀。
試驗方法：用pH7.2的磷酸緩沖液配制成含1％葡萄糖酸鹽（可用*或*）的溶液。分裝試管，每管2mL。刮取適溫培養18－24小時的菌苔至2mL的葡萄糖酸鹽溶液中制成濃的菌懸液，置30℃過夜，然后每管加入0.5mL的斐林試劑，放在沸水浴中加熱10分鐘，試管中液體由藍色變為黃綠，綠橙色或出現紅色沉淀者為陽性反應，如溶液不變色者為陰性。
17、硫化氫-靛基質-動力（SIM）瓊脂試驗
試驗方法：以接種針挑取菌落或純養物穿刺接種約1/2深度，置36±1℃培養18~24h，觀察結果。培養物呈現黑色為硫化氫陽性，混濁或沿穿刺線向外生長為有動力，然后加Kovacs氏試劑數滴于培養表面，靜置10min，若試劑呈紅色為靛基質陽性。培養基未接種的下部，可作為對照。
本試驗用于腸桿菌科細菌初步生化篩選，與三糖鐵瓊脂等聯合使用可顯著提高篩選功效。
18、β-半乳糖苷酶（ONPG）的測定
本試驗應用于腸肝菌科的鑒定。
測定步驟：
（1）將測定菌接種于TSI斜面上，培養于37℃18h（或其他zui適溫度）
（2）挑取1大環菌苔入約0.25mL的生理鹽水中制成菌懸液，每管加1滴甲苯，搖勻（有助于酶的釋放），于37℃放置5分鐘。
（3）在菌懸液中加入0.25mL的0.75mol/L ONPG，測定管置于37℃水浴培養。經30分、1、2、3、……24h進行觀察，如有黃色者則為陽性。
19、耐鹽性試驗
本試驗是觀察滲透壓對細菌生長的影響。由于不同菌類耐鹽性不同，故常以此作為鑒別特征。一般可根據不同種類的菌株，選擇其適合生長的培養基，在其中加入不同量的NaCl，接種后觀察其生長與否，以判斷其耐鹽性。
以肉湯培養液根據鑒定需要，配成不同濃度的NaCl，如2％、3.5％、5％、7％、10％等。培養基要求十分澄清，接種時應采用幼齡菌液，直針接種，適溫培養3－7d，與未接種的對照管對比，目測生長情況。
20、*酶的測定
菌體如存在有*酶，就能使*分解生成脂肪和水溶性的磷酸*。
接種與觀察結果：將測試菌的菌液，環接在有卵黃的試管和不加卵黃的對照管中，適溫培養1、3或5天觀察。假若與對照管相比較，在卵黃胰胨液中或表面，形成白色沉淀者，則為陽性反應，表示*被分解，生成脂肪和水溶性的磷酸*，說明有卵磷酶的存在。
另一種方法：
以無菌操作取出卵黃，放入滅菌的三角瓶中，加相當于等量的生理鹽水搖勻后，取10mL卵黃液加入到溶化的約50－55℃的200mL肉汁胨瓊脂培養基中，混合均勻后倒入培養皿，制成卵黃平板，過夜后即可使用。
接種與觀察結果：將測試菌點接在卵黃平板上，每皿可分散點接4－5株菌、（芽孢桿菌以點接1－2株菌為宜）以不影響結果觀察為度，如測試厭氧菌，則須在上面加蓋無菌的蓋玻片。每株菌至少重復點接兩皿。適溫培養1－2d觀察，在菌落周圍形成乳白色混濁環，表示*被分解，生成脂肪，說明該菌株有*酶存在。

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