多聚半乳糖醛酸酶酶活測定意義
多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一種細胞壁結合蛋白,可以催化果膠分子中 α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,參與果膠的降解,使細胞壁結構解體,導致果實軟化,與果實成熟、葉和花的脫落、病原物防御,細胞伸展發育以及木質化有關,在植物抗病性和食品貯藏保鮮領域具有較高的研究價值。
多聚半乳糖醛酸酶酶活測定原理
多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸,具有還原性醛基,與 DNS 試劑反應生成紅棕色物質,在 540nm 有特征吸收峰,測定 540nm 處吸光值變化可計算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
多聚半乳糖醛酸酶酶活樣本前處理的操作
1.組織:按照組織質量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,
加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。16000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104 個) :提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議
500 萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 16000g,4℃離心 10min,取上清置于冰上待測。
3.培養液:直接檢測。
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