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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)*的稀釋液
ELISA試劑盒高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作劑運(yùn)用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,并且后的載體不易長(zhǎng)時(shí)間保存,因此在試劑盒的制備中較少運(yùn)用。
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時(shí)間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特色和資料的性質(zhì)而選定。
特別是用單抗腹水直接包被時(shí),因其中很多非抗體蛋白在包被時(shí)相同也吸附在固相表面,業(yè)已起到了相似劑的效果。
通常在ELISA板孔中參加包被液后,在4-8℃冰箱中放置過(guò)夜,37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有對(duì)等的包被效果。
并非一切的ELISA固相均需,不妥反而會(huì)使陰性本底增高。
脫脂奶粉也是一種杰出的劑,其zui大的特色是價(jià)廉,能夠高濃度運(yùn)用(5%)。
抗體和蛋白質(zhì)抗原通常選用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。
ELISA試劑盒的手續(xù)與包被相相似。
通常蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的改變,每批資料需經(jīng)過(guò)試驗(yàn)與酶物的濃度協(xié)調(diào)選定。
通常說(shuō)來(lái),雙抗體夾心法,只需酶符號(hào)物是高活性的,操作時(shí)洗刷*,不經(jīng)也可得到滿足的成果。
是不是必要,取決于ELISA的形式及詳細(xì)的試驗(yàn)條件。
繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的進(jìn)程。
包被好的ELISA板枯燥后放入密封袋或錫袋中,在低溫可保存數(shù)月。
抗原或抗體包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占有的曠地閑暇,即是讓很多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地閑暇,然后排斥在ELISA這以后的過(guò)程中攪擾物質(zhì)的再吸附。
但在直接法測(cè)定中,通常是不行少的。
ELISA試劑盒zui常用的劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為劑的。
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