人胸膜瘤細胞操作前打開紫外燈30-60分鐘，這個大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果，但紫外消毒期間建議不要進去一次特意打開抽濾裝置，可以與紫外燈一起打開，人胸膜瘤細胞此時不需要抽濾開的過大就可以。（所謂的抽濾裝置就是就是那個風機，就是吹風超凈工作臺，不是過濾培養液的）!

細胞傳代培養（消化法）具體操作：

一：傳代前準備；

1.預熱培養用液：把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。

2.用75％酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準備好將要使用的消毒后的空培養瓶，放入微波爐內高火，8分鐘再次消毒。

6.取出預熱好的培養用液：人胸膜瘤細胞取出已經預熱好的培養用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內。

7.從培養箱內取出細胞：注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出舊培養液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細胞，*消化溫度是37℃。

2. 人胸膜瘤細胞 顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養液。

三：吹打分散細胞；

1.吹打制懸：用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液。

2.吸細胞懸液入離心管：將細胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中，以1000轉/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養液：棄去上清液，加入2ml培養液，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。

四：分裝稀釋細胞；

1.分裝：將細胞懸液吸出分裝至2-3個培養瓶中，加入適量培養基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察細胞量，必要是計數。注意密度過小會影響傳代細胞的生長，傳代細胞的密度應該不低于5×105/ml。zui后要做好標記。

五：繼續培養；

用酒精棉球擦拭培養瓶，適當旋松瓶蓋，放入CO2培養箱中繼續培養。人胸膜瘤細胞傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當生長細胞鋪展面積占培養瓶底面積25％時為一個＋，占50％為＋＋，占75％時為＋＋＋。  

XY1734    SV40永生化的人胚腎上皮細胞,293T細胞

XY1735    SV40T轉化的人胚腎細胞（亞系） 293T/17細胞

XY1736    SV40 轉染成骨細胞,hFOB 1.19細胞

XY1737    SV40 轉化的非洲綠猴腎細胞, COS-1細胞

XY1738    SRSV轉化的3T3細胞) SRSV/3T3?細胞

XY1739    SD大鼠骨髓間充質干細胞,SDBMSC細胞

XY1740    RD(惡性胚胎橫紋肌瘤細胞)? RD細胞

XY1741    NFS-60細胞,NFS-60細胞

XY1742    mouse N3 mouse N3細胞

XY1743    Mo-MuLv感染的3T3細胞,Mo-MuLv/3T3細胞

XY1744    LLC小鼠 Lewis 肺癌細胞,Lewis細胞

XY1745    Leuwis肺癌細胞,LLC細胞

XY1746    KM小鼠子宮頸癌瘤株 U27細胞

XY1747    KM小鼠未分化神經膠質瘤瘤株 B22細胞

XY1748    KM小鼠網織細胞肉瘤瘤株 LⅡ細胞

XY1749    KM小鼠腦神經膠質母細胞瘤瘤株 G422細胞

XY1750    K562耐阿霉素細胞株 K562/ADP細胞

XY1751    HPVl6 E6、E7和ras基因共轉化的C57BL／C(H-2b)小鼠肺上皮細胞,TC-1細胞

XY1752    HEK293,人胚腎上皮細胞,293A細胞

XY1753    EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞,B95-8細胞

XY1754    EBV 轉化的絨猴白細胞,B95-8細胞

XY1755    EB 病毒轉化的B 細胞,CGM1細胞

XY1756    CCL13張氏肝細胞正常 Chang liver細胞

XY1757    C57小鼠黑色素瘤瘤株 ME細胞

XY1758    C3H小鼠骨肉瘤 LM8細胞

XY1759    B淋巴細胞, WEHI 22.1細胞

XY1760    Burkitt's 淋巴瘤細胞,Raji細胞

XY1761    Burkitt's 淋巴瘤細胞,NAMALWA細胞

XY1762    BALB/C小鼠胚成纖維細胞,BALB/3T3細胞

XY1763    BALB/C小鼠肝上皮細胞,BNL1ME A.7R.1細胞

XY1764    BALB/c小鼠ES細胞,B/c-ES細胞

XY1765    Asp2人胚胎腎細胞轉化細胞,FC33細胞

XY1766    Ad5DNA轉化的胚腎 HEK-293細胞

XY1767    615小鼠網織細胞性白血病瘤株 L615細胞

XY1768    615小鼠乳腺癌瘤株 Ca763細胞

XY1769    615小鼠乳腺癌瘤株 Ca761細胞