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ELISA抗原競爭法檢測樣品中sIL-2R含量

時間:2016/11/10閱讀:948
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ELISA抗原競爭法檢測樣品中sIL-2R含量


[ELISA抗原競爭法檢測樣品中sIL-2R含量] 實(shí)驗(yàn)試劑 1. FITC標(biāo)記的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml):FITC為異硫氰酸熒光素,這里僅作為半抗原使用,而不作為熒光素標(biāo)記。2. 堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體(酶標(biāo)抗體)3. 對硝基苯磷酶鹽底物液;用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解,配成濃度為1mg/ml。4. 1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS):為封閉液點(diǎn)稀釋液5. 不同倍比稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品:以1 [sIL-2R含量 ELISA抗原競爭法 抗體 包被 抗原]

實(shí)驗(yàn)試劑

1. FITC標(biāo)記的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml):FITC為異硫氰酸熒光素,這里僅作為半抗原使用,而不作為熒光素標(biāo)記。

2. 堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體(酶標(biāo)抗體)

3. 對硝基苯磷酶鹽底物液;用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解,配成濃度為1mg/ml。

4. 1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS):為封閉液點(diǎn)稀釋液

5. 不同倍比稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品:以1% BSA-PBS稀釋。

6. 洗滌液(0.05%Tween20-PBS)

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

96孔酶標(biāo)板(聚苯乙烯板),酶標(biāo)儀,波長465nm濾光片,刻度吸管,毛細(xì)吸管,加樣器(頭),4℃冰箱

實(shí)驗(yàn)材料

1. 純化或重組的IL-2R蛋白(α鏈,P55,CD25,Tac抗原)(40.000u/ml)

2. 待測sIL-2R樣品

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 以一定濃度的純化或重組的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶標(biāo)板,100ul/孔,4℃過夜(16-72h);

2. 棄包被液,用1%BSA-PBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),200ul/孔,置室溫2h;

3. 用洗滌液加滿各孔置3min,然后傾去,反復(fù)洗滌3次;

4. 分別加入不同稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品,50μl/孔;

5. 各孔均加入FITC標(biāo)記的IL-2R McAb,50μl/孔,充分混勻后置室溫2h;

6. 同上洗滌3次;

7. 各孔均加入堿性磷酶酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體,100μl/孔,置室溫1h;

8. 同上洗滌3次;

9. 各孔均加入底物液,100μl/孔,置室溫15-30min;

10. 用酶標(biāo)儀以波長405nm測各孔OD值。

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