DT40雞淋巴瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)DT40雞淋巴瘤細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離 心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
EthyltriphenylphosphoniuM broMide 乙基三苯基溴化膦 1530-32-1
Ethyne, chloro- (9CI) 593-63-5
D-THREONINOL D-蘇氨醇 44520-55-0
Duloxetine (S)-(+)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩)-丙胺 116539-59-4
Duloxetine hydrochloride * 136434-34-9
D-XYLULOSE D-木酮糖 551-84-8
D-XYLULOSE 5-PHOSPHATE SODIUM SALT 105931-44-0
dyneMicin A 124412-57-3
FARNESENE α-法呢烯 502-61-4
E-2-(DIHYDROFURAN-2-YLIDENE)-1-PHENYLETHANONE 69706-65-6
E-2-Hexanal 2-已烯醛 6728-26-3
EBECRYL P 36 85340-63-2
Ebrotidine 乙溴替丁 100981-43-9
eburnaMenin-14(15H)-one 474-00-0
EC 1.1.1.1 乙醇脫氫酶(取自焙烤酵母) 9031-72-5
Galactosyltransferase froM bovine Milk 9031-68-9
ECD 14344-58-2
Ecgonine Methyl ester hydrochloride 38969-40-3
Echinenone 海膽烯酮 432-68-8
Echinocandin B 棘球白素(*) B 79411-15-7
E-CHLOROCAPRONITRILE 五氯戊氰 6628-78-0
Trabectedin 他比特啶 114899-77-3
E-Dec-5-ene-2,9-dione 71972-34-4
ethylenediaMinetraacetic acid 乙二胺四乙酸 60-00-4
EDTA DISODIUM DIHYDR.,TITRIPLEX III 94108-75-5
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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