TT人甲狀腺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)TT人甲狀腺癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min 。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
FMoc-Lys-(cl-Z)-OH Fmoc-(2-氯芐氧基羰基)賴氨酸 133970-31-7
FMOC-NH-(PEG)2-COOH 916585-44-9
FMoc-NH-dPEG8-COOH 756526-02-0
fMoc-O-tert-butyl-L-hydroxyproline Fmoc-4-叔丁氧基-L-* 122996-47-8
FMOC-SER(GALNAC(AC)3-ALPHA-D)-OH N-芴甲氧羰基-O-BETA-(2-乙酰氨基-2-脫氧-3,4,6-三-O-乙酰基-ALPHA-D-吡喃半乳糖基)-L-* 120173-57-1
FMOC-TRANS-4-FLUORO-PRO-OH 203866-20-0
FMOC-TYR(TBU)-SER(PSI-ME,MEPRO)-OH 878797-09-2
Folic Acid(VitaMin M or V) * 59-30-3
Fondaparinux SodiuM 磺達肝癸鈉 114870-03-0
Forchlorfenuron 氯吡脲 68157-60-8
ForMaldehyde 甲醛 50-00-0
ForMaldehyde, polyMer with (chloroMethyl)oxirane, 4,4-(1-Methylethylidene)bisphenol and phenol 40216-08-8
FORMAMIDINE HYDROCHLORIDE 甲脒鹽酸鹽 6313-33-3
FORMIC ACID LITHIUM SALT 甲酸鋰鹽 556-63-8
FORMIC-13C ACID 1633-56-3
ForMoterol FuMarate 富馬酸* 43229-80-7
ForMyl acetate 甲乙酐 2258-42-6
FORSKOLIN, 7-DEACETYL-7-O-HEMISUCCINYL- 福斯高林7-O-半琥珀酰-7-脫乙酰基 83797-56-2
Foscarnet SodiuM * 63585-09-1
英文名稱 中文名稱 CAS號
ethanon2-Acetyl-1-pyrroline 85213-22-5
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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