PC-12腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體PC-12腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞):
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Polybutyleneglycol bis(4-benzoylphenoxy)acetate 聚丁二醇250二-(2-羧甲氧基苯甲酮)酯 515136-48-8
POLYETHYLENEIMINE, BRANCHED 聚乙烯亞氨 9002-98-6
PolyhexaMethylene biguanide (PHMB) 聚(六亞甲基雙氰基胍-六亞甲基二胺)鹽酸鹽 27083-27-8
Poly(iMinocarboniMidoyliMinocarboniMidoyliMi,6-hexanediyl) 28757-47-3
Poly(iMinocarboniMidoyliMinocarboniMidoyliMi,6-hexanediyl) hydrochloride 聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽 32289-58-0
POLY(ISOBUTYLENE) 聚異丁烯 9003-27-4
Poly(lactic acid) 3,6-二甲基-1,4-二惡烷-2,5-二酮聚合物 26680-10-4
Polyaspartic Acid 聚天冬氨酸鈉 181828-06-8
POLYBUTADIENE DIACRYLATE 聚丁二烯 9003-17-2
polycaprolactone Mw 100,000-190,000 聚己內(nèi)酯 25248-42-4
polycarbophil 聚卡波非 9003-97-8
polydiMethylsiloxane 硅油 63148-62-9
Polyepichlorohydrin 環(huán)氧樹脂 24969-06-0
POLY-EPSILON-CBZ-L-LYSINE N'-芐氧羰基-L-賴氨酸聚合物 25931-47-9
Polyethylene glycol Methacrylate phosphate 聚乙二醇甲基丙烯酸磷酸酯 35705-94-3
Polyethylene glycol Monolaurate 聚乙二醇單月桂酸酯 9004-81-3
PiMecroliMus 吡美莫司 137071-32-0
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
PeMirolast 吡嘧司特 69372-19-6
Penduletin PENDULETIN 569-80-2
Penicillin 阿地西林 525-94-0
Penicillin aMidase *(酰胺)酶 9014/6/6
Penicillin G sodiuM salt *鈉 69-57-8
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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