3T3-Swiss albino胚胎成纖維細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)3T3-Swiss albino胚胎成纖維細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Quipazine 5786-68-5
REPERTAXIN L-LYSINE SALT 446024-42-6
R(-)-2,10,11-Trihydroxy- N-propylnorapoMorphine hydrobroMide
R(-)-GAMMA-VINYL GABA (R)-4-AMINOHEX-5-ENOIC ACID 77162-51-7
R-(?)-ApoMorphine hydrochloride heMihydrate 阿樸* 41372-20-7
R-406 R-406 841290-80-0
R428 1037624-75-1
RAC D 617 (N-METHYL-4-(3,4-DIMETHOXYPHENYL)-4-CYANO-5-METHYLHEXYLAMINE) N -甲基- 4 -(3,4 -二甲氧基苯基)- 4 -氰基- 5 - 己基甲胺 34245-14-2
Racecadotril * 81110-73-8
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
Polyethylene glycol diMethyl ether 聚乙二醇二甲醚 24991-55-7
POLYETHYLENEGLYCOL 300 MONODECYL ETHER α-癸基-ω-羥基聚環(huán)氧乙烷 26183-52-8
SODIUM POLYPECTATE 多聚半乳糖醛酸鈉 9049-37-0
polyglycolide 聚乙醇酸 26009-03-0
Polyguanylic acid potassiuM salt 54684-83-2
polyiodostyrene 9037-49-4
Polyisobutylene succiniMide 84605-20-9
POLYISOPRENE, CHLORINATED 氯化-2-甲基-1,3-丁二烯的均聚物 68441-58-7
polylactic acid 聚(L-乳酸) 26100-51-6
ε-POLYLYSINE 聚賴氨酸 25104-18-1
polyMethacrylic acid 2-甲基-2-丙烯酸的均聚物 25087-26-7
polyMyxin B nonapeptide hydrochloride 86408-36-8
polyoxyethylene 25 propylene glycol stearate 甲基環(huán)氧乙烷與環(huán)氧乙烷和單十八烷酸酯的聚合物 37231-60-0
PolyquaterniuM-10 聚季銨鹽-10 81859-24-7
PolyquaterniuM-32 聚季銨鹽-32 35429-19-7
PolyquaterniuM 53 聚季銨鹽-53 84647-38-1
PolyquaterniuM-11 聚季銨鹽-11 53633-54-8
POLYQUATERNIUM-58 聚季銨鹽-58 88230-37-9
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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