SRSV/3T3SRSV轉化的3T3細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SRSV/3T3SRSV轉化的3T3細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
Propionic anhydride 丙酸酐 123-62-6
purity 96-98% 61177-44-4
p-Xylene 對二甲苯 106-42-3
Pyocyanin 綠膿素 85-66-5
PYRAZIN-2-YL-HYDRAZINE 吡嗪-2-肼 54608-52-5
Pyrazine, 2,6-diethynyl- (9CI) 680-98-8
Pyrazine,2-Methoxy-5-Methyl- 2-甲氧基-5-甲基吡嗪 2882-22-6
Pyrazinecarbonitrile, 3-aMino-6-propyl-, 4-oxide (9CI) 50627-14-0
Pyrazino[2,3-f]quinoxaline 吡嗪-喹啉 231-23-2
Pyrazolo[1,5-a]-1,3,5-triazine-2,4(1H,3H)-dione 吡唑并[1,5-A]-1,3,5-三嗪-2,4(1H,3H)-二酮 34683-40-4
Pyrazolo[1,5-a]pyridine 吡唑并[1,5-a]吡啶 274-56-6
Pyridazine-4-boronic acid pinacol ester 噠嗪-4-硼酸頻那醇酯 863422-41-7
Pyridine, 2-(4-broMo-1H-iMidazol-2-yl)- 71048-48-1
PYRIDINE, 2,6-DIFLUORO-4-IODO- 685517-71-9
Pyridine, 2-chloro-4-(chloroMethyl)- (9CI) 2-氯-4-(氯甲基)吡啶 101990-73-2
Pyridine, 2-chloro-4,5-diMethyl- (9CI) 343268-69-9
Pyridine,2-fluoro-4-iodo-6-Methyl- 2-氟-6-甲基-4-碘吡啶 884494-45-5
Pyridine,2-Methyl-3-[(5-nitro-2-pyridinyl)oxy]- 200940-26-7
PYRIDINE-2-SULFONYL CHLORIDE 吡啶-2-磺酰氯 66715-65-9
Pyridine-3-boronic acid 吡啶-3-硼酸 1692-25-7
Pyridine-3-sulfonaMide 吡啶-3-磺酰胺 2922-45-4
PYRIDINE-3-SULPHONIC ACID 3-吡啶磺酸 636-73-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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