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CHL/IU CHL-11 中國倉鼠肺細胞

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更新時間:2016-07-16 06:31:53瀏覽次數:311次

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細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)CHL/IU [ CHL-11 ]中國倉鼠肺細胞
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。CHL/IU [ CHL-11 ]中國倉鼠肺細胞加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。

其他*產品:
Selenophene 硒酚 288-05-1
SELENOUREA 硒脲 630-10-4
SeletracetaM  357336-74-4
SeMagacestat 司馬西特 425386-60-3
SeMapiMod 塞馬莫德 352513-83-8
seMduraMycin 生度米星 113378-31-7
Se-Methyl-Selenocysteine 硒甲基硒代半*(-20℃) 26056-90-2
Sephasex -G25 干酪酸 9041-35-4
Sergliflozin etabonate 2-[(4-甲氧基苯基)甲基]苯基-BETA-D-吡喃葡萄糖苷-6-(乙基碳酸酯) 408504-26-7
Sesquicarbonate  6106-20-3
Si3N4 SILICON NITRIDE 氮化硅 12033-89-5
Siccanin * 22733-60-4
Silane,tetra(Methyl-d3)- (6CI,8CI,9CI)  18145-38-5
Sildenafil citrate * 171599-83-0
Silica Gel (PPTD) Micronized 1000gM 硅凝膠 112926-00-8
siliclc acid  10193-36-9
Silicon powder 硅 7440-21-3
Silicon, isotope ofMass 32  15092-72-5
Silver bis(trifluoroMethanesulfonyl)iMide 雙三氟甲烷磺酰亞胺銀鹽 189114-61-2
Silver dichroMate 重鉻酸銀 7784/2/3
SILVER NITRATE CHEM * 7761-88-8
SILVER PROTEIN 蛋白銀 9008-42-8
Silver sulfadiazine *銀 22199-08-2
SiMiarenol SIMIARENOL 1615-94-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則  慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。

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