CRFK貓腎細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)CRFK貓腎細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
Viridiflorol 552-02-3
vitaMin A acid ethylaMide 33631-41-3
VitaMin A Propionate *丙酸酯 7069-42-3
VitaMin C MagnesiuM ascorbyl phosphate VC 磷酸酯鎂 108910-78-7
VitaMin C water Soluble 維生素 C 50-81-7
VitaMin C Oil Soluble /L-Ascorbyl PalMitate L-抗壞血酸棕櫚酸酯 137-66-6
VitaMin K1 維生素 K1 84-80-0
TRICHLOROTRIFLUOROETHANE 三氯三氟乙烷 26523-64-8
Tricyclohexylphosphine[1,3-bis(2,4,6-triMethylphenyl)iMidazol-2-ylidene] [2-thienylMethylene]rutheniuM(II) dichloride, Min. 95% 三環[1,3 -二(2,4,6*苯)咪唑- 2 -亞基] [2 -噻吩亞甲基]釕 1190427-49-6
TRIDECANOIC ACID 十三酸 638-53-9
TRIDECANOL 十三烷醇 26248-42-0
TriethanolaMine borate 三乙醇胺硼酸酯 15277-97-1
triethanolaMine borate 三乙醇胺硼酸鹽 283-56-7
TRIETHANOLAMINE sulfate 硫酸TEA鹽 7376-31-0
Triethoxysilyl Modified poly-1,2-butadiene 72905-90-9
TRIETHOXYSILYLPROPYLMALEAMIC ACID 三乙氧基硅基丙基馬來酸 33525-68-7
TRIETHYL 1 3 5-TRIAZINE-2 4 6-TRICARBOX& 1,3,5-三嗪-2,4,6-*酸三乙酯 898-22-6
Triethyl phosphate 磷酸三乙酯 78-40-0
triethylaMine 三乙胺 121-44-8
TRIETHYLENE GLYCOL DIMETHYL ETHER 三甘醇二甲醚 112-49-2
triethylgalliuM 三乙基化鎵 1115-99-7
TriethylMethyllead 三乙基甲基鉛 1762-28-3
Triethylphosphin 三乙基膦 554-70-1
Trifluoperazine 三氟拉嗪 117-89-5
TRIFLUOROMETHANESULFONIC ACID TRIFLUOROMETHYL ESTER 3582/5/6
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |