P815肥大細胞瘤細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體P815肥大細胞瘤細胞):
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
3-BROMO-6-CHLORO-2-FLUOROPYRIDINE 3-溴-6-氯-2-氟吡啶,95% 885952-18-1
NA 898838-57-8
DetoMidine hydrochloride 鹽酸地托咪定 90038-01-0
Propylene Glycol Alginate 藻酸-1,2-丙二醇酯 9005-37-2
Tergitol NP-33 壬基酚聚氧乙烯醚 9016-45-9
hydroxypropyl starch 羥丙基淀粉 9049-76-7
Pseudoephedrine 90-82-4
6-Methylquinoline 6-甲基喹啉 91-62-3
2,4-Dichloropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazine 2,4-二氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪 918538-05-3
DiMethocaine 二甲卡因 94-15-5
Benzoyl peroxide 過氧化二苯甲酰 94-36-0
MOMORDINIC 地膚子皂苷ⅠC 96990-18-0
Cyclopropane,1,1-dibroMo-2,2-bis(chloroMethyl)- 1,1-二溴-2,2-二(氯甲基)環丙烷 98577-44-7
(1S)-1α-(3,5-DiMethoxy-4-hydroxyphenyl)-6,8-diMethoxy-7-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene-2β,3α-diMethanol LYONIRESINOL 14464-90-5
1-(2-AMINO-5-CHLOROPHENYL)-2,2,2-TRIFLUOROETHANONE 1-(2-氨基-5-)-2,2,2-三氟乙酮 154598-53-5
TEZAMPANEL 154652-83-2
1-benzylpyrazol-4-amine 4-氨基-1-芐基吡唑 28466-62-8
D-Ribitol-5-phosphate D-核糖醇-5-磷酸 35320-17-3
PYRVINIUM PAMOATE 撲蟯靈 3546-41-6
Trichloroethane 1,1,1-三氯乙烷 71-55-6
英文名稱 中文名稱 CAS號
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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