SK-OV-3卵巢癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SK-OV-3卵巢癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(R)-BoroAla(+)-Pinanediol-HCl 919103-31-4
(R)-CitalopraM (R)-西酞普蘭 128196-02-1
(R)-CitalopraM oxalate (R)-草酸西酞普蘭 219861-53-7
(R)-C-PYRROLIDIN-2-YL-METHYLAMINE (R)-2-(氨甲基)吡咯烷 72300-69-7
(R)-CYCLOHEXYL SONIPHOS 398128-03-5
(R)-DIPHENYLALANINOL 171037-01-7
(R)-Matsutake alcohol, but also known as (R)-(-)-1-Octen-3-ol. -(-)-1-辛烯-3-醇 3687-48-7
(R)-Methyl oxirane-2-carboxylate (R)-縮水ganyou酸甲酯 111058-32-3
ArModafinil 2-[(R)-(二苯基甲基)亞磺?;鵠乙酰胺 112111-43-0
(R)-Morpholine-2-carboxylic acid (R)-嗎啉-2-甲酸 1212396-52-5
(R)-N-(2-(Benzyloxy)-5-(2-broMo-1-hydroxyethyl)phenyl)forMaMide (R)-N-(2-(芐氧基)-5-(2-溴-1-羥基乙基)苯基)甲酰胺 201677-59-0
(R)-N-(2,3-DIHYDRO-1H-INDENYL)ADENOSINE (R)-N-(2,3-二氫-1H-茚基)腺苷 96392-15-3
(R)-N,alpha-diMethylphenethylaMine hydrochloride 826-10-8
(R)-N-Boc-3-hydroxypyrrolidine N-叔丁氧羰基-(R)-3-吡咯烷醇 109431-87-0
(R)-N-FMOC-4-FLUOROPHENYLGLYCINE 374791-03-4
(R)-piperazine-2-carbonitrile (R)-2-氰基哌嗪 1217839-54-7
KNS-760704 普拉克索雜質(zhì)E 104632-28-2
(R)-tert-Butanethiosulfinate R-(+)-叔丁基亞磺酸硫代叔丁酯 67734-35-4
TERT-BUTYL (R)-(+)-4-FORMYL-2,2-DIMETHYL-3-OXAZOLIDINECARBOXYLATE (R)-4-甲酰基-2,2-二甲基-3-惡唑啉羧酸叔丁酯 95715-87-0
(R)-VAPOL HYDROGENPHOSPHATE 磷酸 871130-18-6
(R*,R*)-alpha-(1-aMinoethyl)benzyl alcohol 36393-56-3
(R*,S*)-4-hydroxy-alpha-[1-(MethylaMino)ethyl]benzyl alcohol hydrochloride 942-51-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |