HEp-2喉表皮樣癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HEp-2喉表皮樣癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(S)-VAPOL phosphoric acid, (S)-2,2μ-Diphenyl-3,3μ-biphenanthryl-4,4μ-diyl phosphate, (S)-18-Hydroxy-8,9-diphenyl-diphenanthro[4,3-d:3μ,4μ-f][1,3,2]dioxaphosphepin-18-oxide S-VAPOL HYDROGENPHOSPHATE 871130-17-5
(S,S)-2,2-BIS(4-PHENYL-2-OXAZOLIN-2-YL)PROPANE (S,S)-2,2'-異丙亞基雙(4-苯基-2-惡唑啉) 131457-46-0
(S,S)-3,4,5-TRIFLUOROPHENYL-NAS BROMIDE 中文名稱暫缺 287384-12-7
(S,S)-N-(p-Toluenesulfonyl)-1,2-diphenylethanediaMine(chloro)(p-cyMene)rutheniuM(II) (S,S)-N-(對(duì)甲苯磺酰)-1,2-二苯乙烷二胺(對(duì)異丙基苯)氯化 192139-90-5
(S,S)-Tartranilic acid (2S,3S)-(-)-苯胺酒石酰胺酸 206761-64-0
(TETRAMETHYLPIPERIDINYL)OXYPROPYLMETHYLSILOXANE-DIMETHYLSILOXANE COPOLYMER, TRIMETHYLSILOXY TERMINATED 四甲基哌啶氧丙基甲基硅氧烷和二甲基硅氧烷的共聚物 182635-99-0
(trans-4-AMinocyclohexyl)acetic acid 2952-00-3
(TriMethyl)MethylcyclopentadienylplatinuM(IV) (*基)甲基環(huán)戊二烯合鉑(IV) 94442-22-5
(Z)-(R)-N-((2-Hydroxy-1-Methyl)ethyl)-9-octadecenaMide (Z)-(R)-N-((2-羥基-1-甲基)乙基)-9-烯十八酰胺 213182-22-0
(Z)-[(octadec-9-enyloxy)Methyl]oxirane (Z)-[(9-十八烯氧)甲基]環(huán)氧乙烷 60501-41-9
(Z)-2-BROMO-2-BUTENE 2-溴-trans-2-丁烯 3017-68-3
(Z)-3-Methylpent-2-en-4-yn-1-ol. (Z)-3-甲基戊-2-烯-4-炔-1-醇 6153/5/5
CIS-4-DECENOIC ACID 順-4-癸烯酸 505-90-8
CIS-9-HEXADECENAL 56219-04-6
(Z)-Cinnarizine 750512-44-8
(Z)-hex-4-enal 4634-89-3
(Z)-PYRIMINOBAC-METHYL 147411-70-9
[(7S)-7-hydroxy-3,4,5,6,7,8-hexahydropyrrolizin-4-iuM-1-yl]Methyl2-hydroxy-2-(1-hydroxyethyl)-3-Methylbutanoate 26131-12-4
sulfobutyl ether B-cyclodextrin 磺丁基-Β-環(huán)糊精 182410-00-0
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
(R)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-Dicarboxylic Acid (R)-1,1'-聯(lián)萘-2,2'-二甲酸 80703-23-7
(R)-2-AMi,2,3,4-tetrahydronaphthalene (R)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺 21966-60-9
(R)-1-[(S)-2-(Di-tert- butylphosphino)ferrocenyl]ethylbis (2-Methylphenyl)phosphine (1R)-1-[雙(1,1-二甲基乙基)膦]-2-[(1R)-1-[雙(2-甲基苯基)膦]乙基]二茂鐵(符合 CAS 標(biāo)準(zhǔn)) 849924-76-1
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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